【摘要】 目的 研究PI-103對耐藥白血病細胞的效果及其機制。方法 四甲基偶氮唑藍(MTT)法研究PI-103對K562及K562/A02細胞增殖的影響,流式細胞術研究細胞內阿黴素濃度的改變。結果 PI-103能顯著抑制兩種細胞株的生長,對敏感和耐藥白血病細胞株具有相同的抑制效果;PI-103能顯著增加細胞內阿黴素的濃度,與阿黴素聯用時,能增加阿黴素對細胞的生長抑制作用,但僅有疊加效應而無協同效應。結論 PI-103對於耐藥白血病是一種有良好應用前景的藥物。
【關鍵詞】 白血病 多藥耐藥 PI-103
多藥耐藥是急性白血病治療失敗的主要原因,其主要機制是P-糖蛋白(Pgp)高表達,將細胞內的化療藥物“泵”出細胞外,導致細胞內藥物濃度過低,使白血病細胞呈現出耐藥表型。如何繞過Pgp的泵作用,逆轉耐藥,提高白血病的治療效果是當前治療的重要方向。K562/A02是由K562細胞經長期阿黴素誘導和克隆篩選而建立的一個耐藥細胞系[1],能在2μg/ml阿黴素中長期生存,對阿黴素的耐藥指數在10以上。它高表達Pgp,是體外研究多藥耐藥的一個較好的細胞模型。
PI-103是一種人工合成的PI3K和mTOR特異性抑制劑。PI3K和mTOR是PI3K/AKT/mTOR信號轉導途徑的重要成員,該信號途徑在腫瘤的發生發展中發揮着重要的作用。近年來發現PI-103對黑色素瘤[2]、肺癌[3]、神經腫瘤[4]等多種腫瘤具有抑制作用,顯示了較好的抗腫瘤效果。本研究旨在研究它對多藥耐藥白血病細胞株K562/A02的作用。
1 材料和方法
1.1細胞株及培養條件 K562及K562/A02細胞株由浙江大學醫學院第一附屬醫院血液病研究所傳代保存。培養基爲含10%胎牛血清的RPMI1640(Gibco公司產品),置37℃、5%CO2、飽和溼度培養箱中培養,K562/A02長期以2μg/ml阿黴素(ADM)加壓培養,在實驗前2周撤除阿黴素。取對數生長期的.細胞進行實驗。PI-103購自美國cayman公司。
1.2MTT法測定細胞增殖:取對數生長期細胞,調整細胞濃度,以1×105個細胞/ml的終濃度接種於96孔培養板,加入不同濃度藥物,空白對照組以培養基補足,每孔總體系0.2ml,CO2孵箱內培養24小時(h),加MTT工作液20μl/孔(美國Sigma公司),置CO2培養箱中孵育4h,1000 rpm/min離心,小心吸去上清,加入二甲基亞碸0.2ml/孔,吹打,使紫藍色甲臢沉澱充分溶解。在酶標儀570nm波長處讀取吸光度值(A)。以時間爲橫軸,A值爲縱軸,繪製細胞生長曲線。實驗重複三次,設復孔三個,取平均值爲最終結果。按下列公式計算細胞增殖率:
細胞生存率=(A處理組-A空白組)/(A對照組-A空白組)*100%
細胞生長抑制率=1-細胞生存率
PI-103對多藥耐藥白血病細胞體外作用的研究
學識都
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