作爲連環素家族的新成員，在細胞黏附和信號轉導中起着至關重要的作用 [1-4]。
它的基因有21 個外顯子，根據其剪切的不同，理論上p120ctn 可產生32 個亞型，所有的亞型都具有相同的犰狳(Armadillo)重複序列，只是C 端或N 端不同[5]。根據其起始翻譯密碼的不同人類的p120ctn 可分爲4 種亞型，但各亞型的生物學功能至今尚未闡明[6,7]。目前在人肺癌中的研究很少，其在肺癌中表達的亞型種類及表達情況仍不清楚。本研究採用免疫熒光和Western Blot 方法，觀察了p120ctn 及其各亞型在肺鱗癌、腺癌中的表達及意義，並探討其與肺癌的臨牀病理因素的關係。
材料與方法材料例原發性肺癌及對應癌旁正常肺組織來自2003 年11 月至2004 年9 月在中國醫科大學第一附屬醫院行外科手術切除的新鮮標本。 患者術前均未接受過放化療。標本取出後立即放入-70℃冰箱保存備用。其中男37 例，女13 例，平均年齡59 歲（32-78 歲）。按年WHO 肺腫瘤組織學分類標準[8]，鱗癌15 例，腺癌35 例；高分化12 例，中分化23 例，低分化15 例；有淋巴結轉移22 例，無淋巴結轉移28 例。依據國際抗癌聯盟(UICC)1999 年修訂的肺癌p-TNM 分期標準[9] ：Ⅰ期13 例，Ⅱ期10 例，Ⅲ期27 例。
方法冰凍組織切片和免疫熒光染色觀察取新鮮肺癌和癌旁正常肺組織標本 OCT 包埋，快速冷凍後製成5μm 厚的切片，貼附於塗有多聚賴氨酸的載玻片上，冷丙酮固定10min 後晾乾備用。
固定後的冰凍組織切片用0.2% Triton X-100 處理15min。正常非免疫動物血清37℃孵育30min。滴加p120ctn 鼠抗人單克隆抗體（1:400，BD Transduction Laboratories），4℃孵育過夜。磷酸鹽緩衝液（PBS）沖洗，每次5min，重複三次。滴加羅丹明標記羊抗鼠熒光標記二抗（1:200，北京中杉），37℃孵育30 分鐘。PBS 沖洗，每次5min，重複三次。DAPI (1:200，SIGMA 公司)覈覆染30min；PBS 沖洗；50%甘油封片，熒光顯微鏡于波長爲527nm 處觀察羅丹明熒光強度,於372nm 波長處觀察DAPI 的熒光染色,確定p120ctn 的表達及定位。
從新鮮肺癌和癌旁正常肺組織標本中取0.125cm3 左右大小的組織塊，加入500μL 裂解液中冰浴下勻漿，4℃靜置24h，低溫高速離心（4℃、13000 轉/分、30min），收集上清。中國碩士論文網爲您提供公共管理碩士論文。
用考馬斯亮蘭法，以牛血清蛋白作爲標準進行蛋白定量，計算各樣品蛋白濃度。
將含 50μg 總蛋白的組織裂解產物進行SDS-PAGE 電泳1.5h 後，轉印至PVDF 膜（100V，），5%脫脂奶粉室溫封閉1h，經TTBS（20mmol/L Tris-HCL，500mmol/L NaCL，）沖洗3 次，抗p120ctn 單克隆抗體（1：400，BD Transduction Laboratories）4℃孵育過夜後，辣根過氧化物酶標記二抗37℃孵育1h，TTBS 洗三次後DAB 顯色。以β爲內對照，用凝膠成像分析系統（Biolmaging Systems,美國）測定p120ctn 各條帶灰度值，並取其與β-actin 的比值爲相對錶達量分析p120ctn 各亞型的表達情況。
統計分析利用 SPSS for Window 11.5 進行統計分析。p120ctn 及其亞型在正常支氣管上皮和癌中表達的關係採用Wilcoxon 符號檢驗, p120ctn 及其亞型表達與臨牀病理因素的關係採用秩相關檢驗，P＜0.05 有統計學意義。
結果免疫熒光結果在癌旁正常肺組織中的支氣管上皮細胞胞膜上強表達，呈現完整、連續的紅色強熒光，而在肺癌細胞中p120ctn 的膜熒光表達明顯減弱，呈現不連續或缺失，並可出現胞漿表達（圖1）。
結果參照預染蛋白分子量標準（賽百盛，北京，中國），在癌旁正常肺組織可見100KDa 和附近有特異性的條帶，對應位置相當於p120ctn 的亞型1(120KDa)和3(100KDa)，而在肺癌組織中亞型1 和3（尤其是亞型1）多表現爲缺失或減弱（圖2）。
對Western Blot 圖像結果的分析表明，包括1 和3 亞型在內的p120ctn 總蛋白在癌旁正常肺組織中的表達明顯高於肺癌組織(P＜0.001，n=50)。p120ctn 的.亞型1 和亞型3 在癌組織中的表達均有不同程度的缺失或減弱（P=0.001，n=50；P＜0.001，n=50)。亞型1 的缺失與各臨牀病理因素無關,而亞型3 的表達缺失與淋巴結轉移呈負相關（P=0.005，n=50，r=0.397），與其他臨牀病理因素無關（表1）。