昆蟲僅具有先天性免疫，不具有適應性免疫，以下是小編蒐集整理的一篇探究克隆柞蠶免疫相關基因克隆的論文範文，歡迎閱讀查看。
前言
昆蟲免疫主要是以產生的抗菌肽、抗病毒因子、凝集素、溶菌酶及蛋白酶抑制劑等多種活性物質，配合多種功能的血細胞建立的一個開放防禦體系。昆蟲僅具有先天性免疫，不具有適應性免疫。昆蟲的先天免疫系統主要分爲細胞免疫和體液免疫2大部分。體液免疫中轉錄因子Rel/NF—κB介導的信號轉導通路主要有Toll通路和Imd通路[1]，昆蟲主要通過這2種通路抵抗微生物的侵染。
研究發現，這2種通路通過激活不同的Rel/NF—κB家族成員調控不同抗菌肽基因的表達，其中Toll通路主要激活轉錄因子Dorsal和Dif，Imd通路主要激活轉錄因子Relish[1—5]。已知的Rel/NF—κB蛋白家族成員有8種，哺乳動物中有5種，昆蟲細胞中的3種分別是Dorsal、Dif和Relish。其中Dorsal和Dif無錨定重複序列，Relish有錨定重複序列。Rel/NF—κB蛋白的主要功能是調節機體免疫應答、炎症反應、細胞凋亡和生長髮育，炎症、癌症、自身免疫疾病等病理過程與NF—κB的過度活化相關[6]。
由於Rel/NF—κB介導的Toll通路與Imd通路在無脊椎動物和脊椎動物中非常保守[1，7]，因此，對昆蟲Rel/NF—κB的研究不僅能夠系統瞭解昆蟲的先天免疫機制，而且可爲深入瞭解高等動物的免疫機制及疾病防治提供重要依據。儘管Rel/NF—κB蛋白在先天免疫過程中起着非常重要的作用，但目前爲止尚未見到有關柞蠶Rel/NF—κB家族成員的報道。本項研究利用生物信息學方法和分子生物學技術，以柞蠶蛹爲試驗材料，克隆柞蠶免疫相關基因Apdorsal的全長cDNA序列，並將其編碼的氨基酸序列與其它物種的Rel/NF—κB氨基酸序列進行比對及構建系統進化樹，利用實時熒光定量PCR技術檢測Apdorsal基因經不同微生物誘導處理後的組織表達變化，爲探討柞蠶的先天免疫機制提供參考。
1材料與方法
1。1材料和主要試劑
供試柞蠶品種爲青6號，柞蠶蛹由遼寧省蠶業科學研究所惠贈，4℃條件下保存備用。大腸桿菌（E。coli）Top10、枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、畢赤酵母（，2010，34（2）：93—96
[15]TakedaK，AkiraS。Tollreceptorsandpathogenresistance[J]。CellMicrobiol，2003，5（3）：143—153
[16]ZambonRA，NandakumarM，VakhariaVN，etal。TheTollpathwayisimportantforanantiviralresponseinDrosophila[J]。ProcNatlAcadSciUSA，2005，102（20）：7257—7262
[17]HiraiM，TereniusO，LiW，etal。BaculovirusanddsRNAinduceHemolin，butnoantibacterialactivity，inAntheraeapernyi[J]。InsectMolBiol，2004，13（4）：399—405