作者：郭淑雲 孫曉莉 黃維國 劉順利
【關鍵詞】 慶大黴素/毒性
Lysisin aspirin protects against gentamicin ototoxicity
【Abstract】 AIM: To study the prevention of gentamicin ototoxicity by lysisin aspirin in guinea pigs. METHODS: Fortyeight guinea pigs were divided into 4 groups with 12 each: gentamicin treated group (GM), Lysisin aspirin treated group (LAP), GM+LAP group and control group. Auditory brainstem response and cochlear preparation transmission electron microscope were used to evaluate the effects of hair cells on hearing threshold and the morphology of hair cells. Serum levels of GM were also tested. RESULTS: GM group developed a progressive threshold shift, reaching 50 dB at 8 kHz and the threshold shift in GM+LAP group was 30 dB (P<0.05). Injury in high frequency was significantly more severe than that in low frequency (P<0.01). Morphological results were consistent with the functional results. LAP did not affect serum levels of GM. CONCLUSION: The results suggest that LAP may be a promising therapeutic agent in reducing gentamicin ototoxicity.
【Keywords】 gentamicins/toxicity; lysisin aspirin; drug interactions
【摘要】 目的： 觀察來比林對抗慶大黴素耳毒性的作用. 方法： 將豚鼠隨機分爲慶大黴素（gentamicin， GM）組、來比林組 (lysisin aspirin， LAP)、GM+LAP組及對照組，採用聽性腦幹反應（ABR）、耳蝸鋪片及透射電鏡技術、觀察用前後聽閾及耳蝸毛細胞形態學改變，並檢測血清尿素氮、肌苷以及慶大黴素血藥濃度. 結果: GM組8 kHz ABR 4 wk平均閾移達50 dB，GM+LAP組平均閾移爲30 dB，差異顯著(P<0.05). 形態學改變與聽力變化一致. GM+LAP組血液中丙二醛較GM組明顯減少(P<0.05). GM+LAP組超氧化物歧化酶活性明顯高於GM組(P<0.05). LAP對慶大黴素血藥濃度沒有影響. 結論： LAP能有效減輕GM的耳毒性作用，水楊酸鹽連接有其他基團並不影響拮抗耳毒性的作用. 並且更加安全,有效,方便臨牀使用.
【關鍵詞】 慶大黴素/毒性；來比林；藥物相互作用
0引言
慶大黴素（GM）早期在臨牀上應用較爲普遍 ，其耳毒性所致的感音神經性聾較爲常見. 近年有研究報道部分自由基清除劑和鐵螯合劑可以減輕氨基糖甙類抗生素的耳毒性［1,2］. 已有實驗證實水楊酸鈉作爲一種自由基清除劑對慶大黴素耳毒性有作用［3,4］. 藥物來比林是乙酰水楊酸與賴氨酸的複鹽，水溶性好，酸度適宜，可作注射用，避免對胃腸道的刺激，並具有更爲強力的解熱鎮痛作用. 我們旨在利用聽性腦幹反應（ABR）、耳蝸鋪片及透射電鏡技術觀察用LAP前後聽閾及耳蝸毛細胞形態變化，測定血清中丙二醛（MDA）超氧化物歧化酶（SOD）含量，測定腎功和血清GM濃度，觀察來比林（LAP）預防慶大黴素耳毒性的作用.
1和方法
1.1材料耳廓反射正常的健康雄性雜色豚鼠，體質量250~350 g, 由第四軍醫大學實驗動物中心提供. 硫酸慶大黴素（西安高科陝西金方藥業公司，批號 020207）,來比林（安徽新力藥業股份有限公司蚌埠塗山分廠， 批號020713）.
1.2方法
1.2.1動物分組及處理48只豚鼠隨機分爲4組，每組12只. 正常對照組，不做任何處理；GM組： GM 120 mg・kg-1 皮下注射，1次・d-1，連續19 d；LAP組： LAP 120 mg・kg-1 皮下注射，2次・d-1，間隔5 h，連續19 d；GM+LAP組：第1次LAP和GM同時注射,5 h後，第2次注射LAP，劑量同上；動物實驗期間每日秤體質量調整用藥量. 用藥前及用藥後9 d, 19 d, 4 wk, 6 wk檢測ABR，第4次測ABR後每組取2只豚鼠斷頭活殺. 一耳供透射電鏡標本的製備，另一耳供光鏡觀察耳蝸鋪片.
1.2.2ABR反應閾檢測豚鼠的ABR 以Ⅲ波最著，動物在戊巴比妥鈉40 mg・kg-1腹腔注射麻醉後，針型記錄電極置前額正中皮下，參考電極置測試耳外耳道口後上皮下，鼻尖接地. 用 Biologic聲刺激器，286自動採樣，採用短純音（tone burst，上升下降時間各2 ms，平臺時間1 ms）1 kHz，8 kHz刺激，間隔75 ms，掃描時間20 ms，疊加256次，帶通濾波80~1500 Hz,在屏蔽隔聲室內常規測試.
1.2.3耳蝸硬鋪片標本製備［5］動物斷頭活殺，取出聽泡，於顯微鏡下在冰盒內快速摘除鐙骨，刺破圓窗，挑開蝸頂；用5~10 g・L-1 AgNO3灌流浸泡15 min；0.1 mol・L-1的磷酸緩衝液（pH=7.4）漂洗；25 mL・L-1戊二醛固定2 h，爆光40~60 min，再置於25 mL・L-1戊二醛固定24 h（置4度冰箱），解剖顯微鏡下常規制備，分離各圈基底膜，甘油封片.
1.2.4透射電鏡標本製備動物快速斷頭活殺，取出並打開聽泡，用25 mL・L-1戊二醛磷酸緩衝液固定，另一隻耳按常規方法制作透射電鏡標本.
1.2.5管碟法測定慶大黴素血藥濃度GM組和GM+LAP組動物第9日和第19日注射慶大黴素後1 h心肌取血，測定血清抑菌環直徑，再查標準曲線圖，得出血清慶大黴素濃度.
1.2.6檢測血清中MDA,SOD用藥後9 d和19 d各組動物心肌取血. 離心，取血清-20℃凍存. 採用南京建成生物工程研究所的丙二醛、超氧化物歧化酶試劑盒，按說明操作檢測.
1.2.7檢測腎功GM組和GM+LAP組動物3 wk注射慶大黴素後心肌取血，1000 r・min-1 離心10 min，取血清凍存，全自動生化分析儀（島津CL8000,日本）測定血清尿素氮和肌苷.
學處理：運用統計學軟件SPSS 10.0 進行組間t，P＜0.05爲有顯著性差異.
2結果
實驗中GM組3只動物死亡，死前均消瘦、耳廓反射消失、無力. GM+LAP組有一隻動物死亡. LAP組及對照組中無死亡.
2.1ABR用藥後各組動物ABR出現閾移(Fig 1, 2). 豚鼠用藥4 wk後平均反應閾變化率達最高閾移, 1 kHz ABR GM組（28.8±2.9）dB比GM+LAP組(42.5±3.7) dB聽力損失大(P<0.05). 8 kHz ABR GM組(14.5±3.6) dB比GM+LAP組(16.8±3.7) dB聽力損失大(P<0.05). 兩組數據經方差分析差異顯著(P<0.05)，高頻聽力損失比低頻重. 對照組和LAP組的反應閾沒有明顯變化（P>0.05）.
aP＜0.05 vs GM＋LAP. GM: gentamicin; LAP: lysisin aspirin.
圖1－圖2 (略)
2.2形態學觀察用藥3 wk後耳蝸鋪片顯示GM組用藥後外毛細胞損傷（Fig 3），從頂回至底回損傷逐漸加重，內毛細胞較外毛細胞損傷輕；GM+LAP組外毛細胞損傷較GM組輕（Fig 4）；透射電鏡見GM組嚴重損傷，缺失的外毛細胞由支持細胞代替（Fig 5）. GM+LAP組病變較輕，主要爲毛細胞胞質稀疏，線粒體變形空化等（Fig 6）.
圖3－圖6 (略)
2.3血清的MDA濃度和SOD活性GM組的MDA濃度高於GM+LAP組，組間差異非常顯著(P<0.01, Tab 1); 在這兩組中19 d時的均高於9 d時，兩組間差異顯著（P<0.05, Tab 1）; GM組SOD的活性低於GM+LAP組，組間差異非常顯著(P<0.01, Tab 1); 在兩組中19 d時的SOD活性，均高於9 d時，差異顯著(P<0.05, Tab 1). GM組和GM+LAP組的MDA含量和SOD活性，均高於LAP組和Blank組(P<0.01 Tab 1).
表1不同用藥時間的血清MDA, SOD含量 (略)
2.4血尿素氮(BUN), 血清GM含量和Cr檢測GM組和GM+LAP組3 wk BUN和Cr的檢測結果，兩組間差異顯著（P<0.01, Tab 2）. 兩組間血清GM含量無明顯差別(P>0.05, Tab 2).
表2不同組間的BUN, GM和Cr檢測結果 (略)
3討論
氨基糖甙類抗生素的耳毒作用機制之一爲自由基學說［