蘇木精染液的染色力測定與評價

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蘇木精染液的染色力主要受蘇木精的氧化狀態影響,氧化不足或過度氧化均可影響其染色力,下面是小編蒐集整理的一篇探究蘇木精染液的染色力測定與評價的論文範文,歡迎閲讀參考。

蘇木精染液的染色力測定與評價

蘇木精染液的染色力是影響HE染色成功的關鍵因素之一,而染色力隨染色時間和切片數量的增加呈進行性下降。實際工作中技術人員大多依據個人經驗來決定蘇木精染液是否需要更換,缺乏統一標準,造成批間差異大。本文通過測定蘇木精染液使用過程中pH值的變化來確定染液的酸度值,評價蘇木精染液的染色力,為實際工作中蘇木精染液的更換提供量化參考指標,從而更好地開展HE染色的質量控制。

1材料與方法

1.1蘇木精染液的配製採用常規使用的改良Lillie-Mayer蘇木精染液,具體配製方法如下[1]:蘇木精5g溶於50ml無水乙醇,50g硫酸鋁鉀充分溶於650ml蒸餾水後與蘇木精無水乙醇液充分混合,加入500mg碘酸鈉,最後加入甘油300ml和冰醋酸20ml,室温靜置1周後備用。

1.2儀器實驗所用染色機為LeicaAutostainerXL,pH值測定計為sartoriusPB-10.

1.3方法隨機挑選胃、腸、肺、淋巴結、乳腺、肝等組織蠟塊,共10塊,每個蠟塊連切18張切片備用;用新蘇木精染液行常規HE染色,分別選取第0、500、1000、1500、2000、2500張切片時測量染液的pH值,每一時間點同步選取實驗備用片進行染色,並更換新的分化液和藍化液;更換蘇木精染液後重複本實驗2次。每批次所染切片均由2名高年資病理醫師與一名技術主管同時對所染切片進行評價,每張切片3者評價結果必須一致,評價結果不一致的切片均算不合格片,每一批10張切片中有4張切片染色評價不合格即可確定染液的染色力不夠需更換。

2結果

2.1pH值與染色切片數量的關係3次實驗中,隨着染色切片數量的增加,染液的pH值也在逐步升高。3次實驗中同一時間點染液pH值的均值與染色切片數量的關係見表1.

2.2pH值與蘇木精染液染色力的關係不同批次的實驗結果顯示,蘇木精染液染色力在染液pH值1.51~1.87間變化小,隨着染色切片數的增加,染液pH值逐漸升高,而染色力不斷下降;第2、3次實驗中,染液累積染色切片至2500,pH值分別達到2.65和2.71時,染色合格片分別只有6和4張(表2).

3討論

蘇木精-伊紅(HE)染色是組織與細胞學最常用的染色方法之一,蘇木精染液的染色力是影響HE染色成功的關鍵因素。蘇木精染液的`染色力主要受蘇木精的氧化狀態影響,氧化不足或過度氧化均可影響其染色力。各類蘇木精染液配製方法的區別主要在氧化方法的選擇及氧化劑用量上。蘇木精染液配製過程中加入醋酸主要是調節染液pH值,當pH值處於合適範圍時,不僅可以抵消氧化劑的過度氧化、促進氧化蘇木精(即蘇木紅)與鋁鹽結合形成藍色色澱、還可維持細胞核呈酸式電離,增強細胞核的選擇性着色,減少蘇木精沉渣與氧化膜的形成[1].不同方法配製的蘇木精染液初始pH值可能不盡相同,但確保蘇木精染液的酸性環境和穩定染液的pH值對蘇木精染液的染色力尤為重要。蘇木精染液染色力隨切片數量的增加呈漸進式下降,其可能的原因:①染液染色過程中蘇木精不斷氧化;②現行HE染色不論是手工還是儀器,大多采用浸染式染色方法,切片脱蠟至水化進入蘇木精染液前不可避免地帶入一些自來水,隨着染液的累積使用,使染液的pH值逐漸升高,染液的顏色和染色力隨之也不斷變化[2].為了儘可能減少由於染液的累積使用而導致染液pH值升高,有研究者在切片進入蘇木精染液前先用2%冰醋酸水溶液或10%檸檬酸水處理,以避免切片水洗後帶入自來水,很好地穩定了染液的pH值,延長了蘇木精染液的使用時間[3].本研究3次重複試驗結果顯示:隨蘇木精染液的累積使用染液pH值不斷升高;染液pH值維持在一定範圍內時染液的染色力穩定,pH值超出範圍後染色力即明顯下降,説明需要更換染液。

參考文獻:

[1]彭霞。不同配方蘇木精染液染色效果觀察[J].診斷病理學雜誌,2009,01:66.

[2]鄭明軍,馬華玲。冰醋酸在蘇木精和伊紅染色中的不同作用[J].診斷病理學雜誌,2013,01:60.

[3]鄭明軍。組織細胞成分和染液pH值對蘇木精-伊紅染色的影響[J].實用醫技雜誌,2013,20(6):668.