【摘要】 探討靈芝孢子對妊高徵大鼠所生幼鼠海馬線粒體相關分子物質的影響。方法:用一氧化氮合酶（nitric oxide synthase， NOS）抑制劑N硝基左旋精氨酸甲酯（Nw-nitro- L- arginine methylester， L- NAME）給予大鼠腹腔注射製備妊高徵模型， 在此基礎上胃飼靈芝孢子。應用cAMP放免法、RT-PCR、酶活力檢測等技術評價靈芝孢子對妊高徵大鼠所生幼鼠海馬線粒體相關分子物質水平的影響。結果:妊高徵孕鼠的剛分娩幼鼠海馬cAMP水平、線粒體DNA（mtDNA）水平及ATP合酶活力都降低。pgc1α表達水平與正常對照大鼠比較沒有變化。 生後30 d的幼鼠海馬cAMP水平、mtDNA水平、ATP合酶活力和pgc1α表達水平低於正常對照大鼠。胃飼靈芝孢子後，妊高徵大鼠的剛分娩幼鼠和生後30 d的幼鼠海馬cAMP水平和mtDNA含量恢復到正常對照大鼠水平，ATP合酶活力和pgc1α表達水平也有恢復性增高。結論:靈芝孢子具有調節妊高徵大鼠所生幼鼠海馬線粒體相關分子物質水平的作用。
【關鍵詞】 大鼠
靈芝孢子（ Ganoderma spore， GS）是經過現代技術加工處理的靈芝生殖細胞，具有一定的防治疾病的功效。本研究組以往研究發現，靈芝孢子可以促進受損傷的神經元存活及其軸突再生［1， 2］，這提示靈芝孢子具有神經生物活性。一氧化氮（nitro-gen monoxide， NO）是調控神經系統和心血管系統功能的重要信使分子。在妊娠高血壓徵（妊高徵）孕婦的血液中發現，NO和精氨酸的`含量降低［3］。我們也發現，應用一氧化氮合酶（nitric oxide syn-thase， NOS）抑制劑N硝基左旋精氨酸甲酯（Nw-nitro- L- arginine methylester， L- NAME）抑制NO生成，可以造成孕鼠的血壓升高及其胎鼠和所生幼鼠海馬的損傷，喂服靈芝孢子後可以部分緩解NO水平降低引起的損害［4， 5］。最新研究提示，NO可以促進線粒體生物發生（mitochondrial biogenesis）［6］。然而，妊高徵孕鼠的NO水平降低是否引起其所生幼鼠海馬線粒體生物發生障礙，目前尚未見報道。本研究試圖探討靈芝孢子對妊高徵大鼠所生幼鼠海馬線粒體相關分子物質水平的影響，爲臨牀服用靈芝孢子干預妊高徵提供實驗資料。
1 材料與方法
1.1 實驗動物 SD成年雌性大鼠40只，體質量200～230 g，11～12周齡;SD成年雄性大鼠10只，體質量250～300 g，13～15周齡。由中山大學實驗動物中心提供，合格證號爲（醫動字）第26-99C016號。按雌雄比例爲2∶1合籠後的第2天觀察雌鼠陰道黏液（塗片法），有精子者被認爲是妊娠0天（E0）。將這些妊娠鼠隨機分爲:（1）正常對照組，於妊娠14～20 d（E14～E20）腹腔注射生理鹽水 胃飼蒸餾水;（2） L -NAME 蒸餾水組，注射 L -NAME 胃飼蒸餾水;（3） L -NAME 精氨酸組，注射 L -NAME 胃飼 L -精氨酸100 mg/（kg·d），分2次胃飼;（4） L -NAME 靈芝孢子組，注射 L -NAME 胃飼靈芝孢子8 g/（kg·d），分2次胃飼;（5）靈芝孢子 L -NAME 靈芝孢子組，注射 L -NAME前 1周 胃飼靈芝孢子8 g/（kg·d），注射 L -NAME後胃飼靈芝孢子8 g/（kg·d），均分2次胃飼。每組 5只。 除正常對照組每天分兩次注射生理鹽水和胃飼蒸餾水外，各組妊娠鼠於E14～E20腹腔注射 L -NAME 60 mg/（kg·d），分2次注射，2次之間相隔10 h。每次注射後2 h，再接着胃飼相應的蒸餾水、 L -精氨酸或靈芝孢子。
1.2 藥物 L -精氨酸購自美國Amresco公司， L -NAME 購自美國Sigma公司。靈芝孢子（2036）購自Holistal International Ltd，批號GANSP- SP04040104。 L -NAME用生理鹽水配製成溶液， L -精氨酸用蒸餾水配製成溶液，靈芝孢子用羧甲基纖維素鈉配製成溶液。
1.3 取材 從上述處理的每隻孕鼠剛分娩的0 d（P0）幼鼠中隨機選擇3只，取其海馬組織，分別用放射免疫、RT-PCR以及酶活力測定等方法進行相關檢測。剩餘幼鼠飼養至生後30 d（P30）後用戊巴比妥鈉麻醉後放在冰盤上分離海馬組織，同樣用上述方法作各項相關檢測。